共聚焦顯微鏡是激光共聚焦顯微鏡的簡稱，它顯微成像主要采用 3D 捕獲的成像技術(shù)，使其具有較高的三維圖像分辨率。這 些都是 通過構(gòu)建顯微照片來實(shí)現(xiàn)的。在熒光顯微鏡使用過程中，由于需要高強(qiáng)度紫外光輔助成像，所以顯微鏡 內(nèi)的汞弧燈產(chǎn)生的強(qiáng)光可能會(huì)導(dǎo)致令人不安的背景噪音，甚至?xí)?dǎo)致光漂白。 激光共聚焦顯微鏡則是通過數(shù)碼相機(jī)針孔的高強(qiáng)度激光來實(shí)現(xiàn)數(shù)字成像的技術(shù)，有效避免了熒光顯微鏡所產(chǎn)生的問題。

激光共聚焦顯微鏡的成像原理:

激光共聚焦顯微鏡中的圖像是來自一個(gè)焦平面的光通過針孔數(shù)碼相機(jī)聚焦拍攝，從而規(guī)避 來自其支點(diǎn)上方或下方的光。固定在設(shè)備上的激光連續(xù)聚焦在樣品的選定區(qū)域，同時(shí)，被樣品吸附的熒光染料也會(huì)被數(shù)碼相機(jī)捕捉。共聚焦設(shè)備包含兩個(gè)旋轉(zhuǎn)鏡頭用來拍攝組圖。

然后通過所累積的不同焦平面的圖像序列，使用軟件編譯完整的 3d 圖像。此圖像可以在軸向（z 軸）和橫向（x 和 y 軸）平面進(jìn)行微調(diào)。這些細(xì)胞和其他矩陣的再現(xiàn)是通過使用雙倒置的光錐照亮物體來實(shí)現(xiàn)的。

使用標(biāo)準(zhǔn)落射熒光顯微鏡所存在的問題是當(dāng)遇到較厚的基質(zhì)或標(biāo)本時(shí)所表現(xiàn)出的熒光程度較大。大于 2 微米的樣品發(fā)出的輻射會(huì)危及生成圖像的準(zhǔn)確性，從而損失成像的細(xì)節(jié)。而激光共聚焦顯微鏡則可以通過縮小激發(fā)范圍并使用光學(xué)切片來消除背景噪聲。