相差顯微鏡的使用
　　1)安裝相差裝置：將普通顯微鏡的聚光鏡卸下,將帶環(huán)狀光欄的聚光鏡裝到相匹配的顯微鏡上;將顯微鏡的普通物鏡卸下,換上帶位相板的物鏡;將目鏡換成相差顯微鏡專用的調(diào)焦目鏡;在光源進(jìn)光處放置專用的綠色濾光片(有時(shí)可以不用)。
　　2) 對光和聚焦：通過調(diào)焦目鏡和粗細(xì)調(diào)節(jié)螺旋的調(diào)節(jié),直至視野中可清晰地看到有一個(gè)白圈和一個(gè)黑圈。黑圈是固定的,白圈則可通過聚光鏡裝置上的調(diào)節(jié)螺旋加以移動(dòng) ,使黑圈與白圈完全重合。取下調(diào)焦目鏡,換上顯微鏡原來的目鏡,即可進(jìn)行檢查。
相差顯微鏡使用中的問題分析
　　1、樣品厚度的影響 當(dāng)進(jìn)行相差觀察時(shí)，樣品的厚度應(yīng)該為5μm或者更薄，當(dāng)采用較厚的樣品時(shí)，樣品的上層是很清楚的，深層則會模糊不清并且會產(chǎn)生相位移干擾及光的散射干擾。
　　2、蓋玻片和載玻片的影響 樣品一定要蓋上蓋上蓋玻片，否則環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)很難重合。相差觀察對載玻片和蓋玻片的玻璃質(zhì)量也有較高的要求，當(dāng)有劃痕，厚薄不均或凹凸不平時(shí)會產(chǎn)生亮環(huán)歪斜及相位干擾。另外玻片過厚或過薄時(shí)會使環(huán)狀光闌亮環(huán)變大或變小。
　　3、暈輪和漸暗效應(yīng) 在相差顯微鏡成象過程中，某一結(jié)構(gòu)由于相位的延遲而變暗時(shí)，并不是光的損失，而是光在象平面上重新分配的結(jié)果。因此在黑暗區(qū)域明顯消失的光會在較暗物體的周圍出現(xiàn)一個(gè)明亮的暈輪。這是相差顯微鏡的缺點(diǎn)，它妨礙了精細(xì)結(jié)構(gòu)的觀察，當(dāng)環(huán)狀光闌很窄時(shí)暈輪現(xiàn)象更為嚴(yán)重。相差顯微鏡的另一個(gè)現(xiàn)象是漸暗效應(yīng)，指相差觀察相位延遲相同的較大區(qū)域時(shí)，該區(qū)域邊緣會出現(xiàn)反差下降。
　　4、相位倒轉(zhuǎn) 當(dāng)n’n時(shí)得到象的明暗反差正好相反，稱為相位倒轉(zhuǎn)。當(dāng)相位差δ=0時(shí)是無法識別的，隨著δ的增大反差變大，當(dāng)δ繼續(xù)增大到某一值后會出現(xiàn)相位倒轉(zhuǎn)。用90%高吸光值(高反差)物鏡時(shí)，這個(gè)轉(zhuǎn)變值約為0.55λ，用70%標(biāo)準(zhǔn)吸光值的物鏡時(shí)約為0.33λ。較高吸光值的物鏡應(yīng)該用于分辨較小的光程差。