為了清晰顯示PTK7在細胞膜上的空間分布細節(jié),中國科學院長春應用化學研究所王宏達研究員團隊和武漢科技大學陳俊玲博士采用超分辨顯微鏡結(jié)合精確的標記方法開展了PTK7組裝的成像工作。
蛋白酪氨酸激酶7(PTK7)作為一種重要的跨膜受體蛋白,參與Wnt和非Wnt信號通路的調(diào)節(jié),影響著細胞的J性、運動、遷移和侵襲、組織再生和傷口愈合等。并且PTK7的異常表達與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān)。鑒于PTK7的重要生物學意義,其研究受到了科學家們的高度重視。但大多數(shù)研究是從改變基因和蛋白質(zhì)表達的角度揭示PTK7的生物學功能,這些方法都是基于大量分子的平均結(jié)果,無法獲得與PTK7功能相關(guān)的單分子信息。因此,考慮到功能與生物分子組裝的密切關(guān)系,要全面了解一個膜分子,首先要實現(xiàn)其精確定位和清晰觀察。共聚焦熒光顯微鏡和全內(nèi)反射熒光顯微鏡已被應用于細胞膜和細胞中PTK7和Wnt信號通路的相關(guān)蛋白的分布研究中。但受成像分辨率的限制,所獲得的信息**于亞細胞結(jié)構(gòu)水平,而非單分子水平。因此,為了清晰顯示PTK7在細胞膜上的空間分布細節(jié),中國科學院長春應用化學研究所王宏達研究員團隊和武漢科技大學陳俊玲博士采用超分辨率顯微鏡結(jié)合精確的標記方法開展了PTK7組裝的成像工作。
近年來,直接隨機光學重建顯微鏡(dSTORM)作為一種先進的超分辨率熒光成像技術(shù),突破了光學衍射J限,獲得了納米級分辨率,成為細胞生物學領(lǐng)域不可或缺的成像工具。為保證*終的超高分辨率,標記方法的選擇至關(guān)重要。熒光探針具有小尺寸、高特異性和優(yōu)異的光物理性質(zhì),將有助于準確定位靶標,*終實現(xiàn)高質(zhì)量成像。采用抗體探針的直接或間接免疫熒光標記是生物熒光成像(包括超分辨熒光成像)中常用的標記方法。然而,抗體探針的大尺寸和多價結(jié)合往往會導致較大的連接誤差、不完全標記和聚簇假象。因此,新型熒光探針的應用對超分辨熒光成像至關(guān)重要。
適配體由于其對靶分子的高親和力和特異性被認為是“化學抗體”。與抗體(如單鏈抗體、Fab)相比,它具有更小的尺寸(通常為20-80個堿基,~6-30 kda),并且是單價結(jié)合。因此,適配體探針可以作為抗體探針的理想替代品。
這里,研究人員采用已報道的可特異性識別PTK7的Sgc8c適配體,將其與TAMRA連接以形成PTK7的特異性熒光探針。在對PTK7分布進行系統(tǒng)的超分辨熒光成像之前,通過雙色成像和抗體探針單色對比成像,證實了Sgc8c-TAMRA的高特異性和標記優(yōu)勢。